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自身免疫性脑脊髓炎模型
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实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是一种以特异性致敏的CD4+T细胞介导为主的,以中枢神经系统内小血管周围出现单个核细胞浸润及髓鞘脱失为特征的自身免疫性疾病,其病理变化与多发性硬化(multiple sclerosis,MS)类似。

由于MS样本不易获取,因此EAE动物模型是研究MS病理过程、发病机制的重要途经,在临床神经免疫学的研究中具有重要意义。


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动物的选择

从鸟类到哺乳类的多种动物如鸡、小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、羊、犬、猴等均可成功诱发EAE,但不同种属或同一种属不同品系动物,其敏感性存在有很大差异,在选择动物时需要寻找EAE模型的敏感动物。

对EAE敏感的动物有Lewis、DA大鼠,PL/J、SJL/J小鼠以及Hartley、Strain13豚鼠等,且鼠的EAE无论在临床表现、病理还是免疫、生化改变等方面都与人类脱髓鞘疾病较为相似,因此,目前大鼠及小鼠的应用最为广泛。

建模方法

EAE诱导方案比较繁杂,各种方案发病机制不尽相同。

(1)主动诱导法

将抗原与佐剂的混合乳剂直接注射至动物体内,经过一定时间的潜伏期,诱导EAE的产生。

常用的致敏抗原有髓鞘碱性蛋白(MBP)以及蛋白脂(PLP)等。此外,髓寡树突细胞糖蛋白(MOG)、髓碱相关糖蛋白(MAG)等也是很强的抗原,髓鞘素(Myelin)、脊髓组织匀浆(SCH)、脑组织匀浆(BH)等也可作为致敏抗原。抗原的提取方法可参考文献。

通常不同品种动物对同一抗原的敏感性不同、不同抗原的抗原性也不同,并且不同来源的同一抗原的活性也有明显差异。在一定范围内抗原的量和EAE的发病率及发病程度有相关性,注射抗原佐剂乳化物的剂量越大,EAE的发病率越高。

提取的抗原需与佐剂混合制成抗原乳剂后才能致敏动物。

抗原佐剂为非特异性免疫增强剂,它可改变抗原的物理性状,延长抗原在体内的储留时间,刺激抗原提呈细胞及淋巴细胞,从而增强和扩大免疫应答效果,它还能引起迟发性血脑屏障通透性增加和自身免疫反应。

最常用的佐剂为完全弗氏佐剂(CFA),它能够提高抗原的免疫反应强度并延长免疫反应时间,提高模型重复率,还可以刺激大量吞噬细胞摄取和呈递抗原以及CD4+T 细胞的活化与扩增。

百日咳杆菌疫苗(BPV)毒素能增加血管壁的通透性和血管表面粘附分子的表达,有利于致敏的T细胞透过血脑屏障,攻击神经髓鞘,造成对脑、脊髓组织的免疫损伤。(有研究表明于CFA中加入BPV可明显提高EAE的发病程度,可使EAE敏感性弱的Wistar大鼠变得敏感。)

目前诱导EAE鼠的常用途径有:髓鞘碱性蛋白(MBP)诱导诱导PL/J小鼠、髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)139-151多肽诱导PL/J小鼠、髓鞘少突胶质细胞糖白( MOG)多肽诱导C57BL/6小鼠等。

PL/J和SJL小鼠分别是MBP和PLP的敏感鼠,在国内难以获得,国内学者尝试用其他非敏感鼠类诱导,但所诱导的模型存在发病率不高或者发病症状轻微等缺点,并不够理想。

MBP诱导

髓鞘碱性蛋白(MBP)是一种由脊椎动物中枢神经系统(CNS)少突细胞和周围神经系统雪旺细胞分泌合成的强碱性膜蛋白。

它是髓鞘中抗原性最强的蛋白质,占髓鞘总蛋白的40%,等电点在10以上,是强碱性蛋白质,研究表明MBP可激活体内Th+细胞,使之穿过血脑屏障,攻击自身神经髓鞘的MBP,从而导致中枢神经白质脱髓鞘,导致CNS炎性细胞浸润和髓鞘脱失,引起EAE或MS。

近年来常用MBP68-86肽可在Lewis大鼠诱导急性EAE,此模型病程较短且无复发过程、发病时间均齐、发病率较高、病情也最重,经组织病理学检测发现该模型鼠的脑和脊髓组织均以急性炎症为主要病变,髓鞘脱失情况不明显。