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细胞迁移
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应用简介
       迁移是肿瘤细胞转移过程中必不可少的环节之一。肿瘤细胞与母体瘤分离,穿越血管壁,侵袭周边正常组织时,需要一定的运动能力。高转移的肿瘤细胞通常具奋较强的运动性。多种物质可剌激肿瘤细胞的迁移,如肿瘤细胞分泌因子、生长因子、细胞外基质成分(FN、LN)以及一些癌转移靶器官的代谢产物或分泌产物等生长因子对肿瘤细胞有趋化作用,可使其发生定向运动。测定方法以细胞划痕法和Transwell小室法。
技术原理
       细胞划痕法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,观察周边细胞是否生长至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组和实验组,实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。
实验方法

技术总结
【注意事项】
       1、铺细胞最好使用6孔板,因为6空板可以保证有相当距离的平直划痕,因为有5条定位线,与划痕相交,这样就有10个可固定监测点,不作重复,误差也很小。
       2、如果连续监测24小时,需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果,而不是单纯的细胞迁移。如果要单纯的考虑细胞迁移,可以先用丝裂霉素(1μg/ml)处理一小时,抑制细胞的分裂,这样结果就是细胞迁移的作用了。另外,使用无血清培养基也可以降低增殖对实验结果的影响。
       3、照片拍完之后,可以用imageJ来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。
       4、虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响,但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节,细胞迁移的速度也会慢很多。
【常见问题】
       细胞划痕时发现细胞没有长满,或是长的太满?
       R铺板时的数量须根据细胞的形态、增殖速度、大小进行调节,细胞较小或增殖速度慢,铺板数量需多于6×105个细胞/孔;细胞较大或增殖速度较快则需少于6×105个细胞/孔;
       细胞铺板时前面铺的孔细胞密度稀后面铺的孔细胞密度密?
       R细胞铺板,细胞单细胞悬液混合后,铺板过程中需要边铺板边晃动管子,保证细胞在悬液中均匀分布;
       拍出来的照片背景颜色不一或亮度不一?
       R在拍照前进行白平衡;固定曝光时间。作为肿瘤细胞转移研究中的重要角色,这个任重道远的过程需要很多必不可少的步骤,准确易行也是对实验的要求之一。