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细胞自噬
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应用简介
       自噬与多种生理反应相关,比如肿瘤,炎症,免疫应答,氧化应激等。通常情况下,对于自噬的研究,除了发生的机制本身外,更多的是将自噬与各种生命活动或者疾病结合起来。比如研究自噬在肿瘤的发生发展,炎症反应,氧化应激等不同生物学功能的作用。
技术原理
       自噬是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,最终将吞食物在溶酶体内降解的过程。自噬体(自噬体)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质,长寿蛋白质和异常蛋白聚集物,损伤或多余细胞器如线粒体,粗面内质网和微体,病毒和细菌等。
自噬过程:
       1、细胞接受自噬诱导信号后,在胞浆的某处形成一个小的类似"脂质体"样的膜结构,然后不断扩张,被称为Phagophore。
       2、Phagophore不断延伸,将胞浆中的任何成分,全部揽入,然后"收口",成为密闭的球状的autophagosome,即"自噬体"。
       3、自噬体形成后,可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合(这种情况不是必然要发生的)。
4、自噬体与溶酶体融合形成autolysosome,期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解,2者的内容物合为一体,自噬体中的"货物"也被降解,产物(氨基酸、脂肪酸等)被输送到胞浆中,供细胞重新利用,而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。
实验方法

技术总结
       一、自噬诱导剂
       1、BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin:模拟内质网应激
       2、Carbamazepine/L-690,330/LithiumChloride(氯化锂):IMPase抑制剂(即Inositolmonophosphatase,肌醇单磷酸酶)
       3、Earle's平衡盐溶液:制造饥饿
       4、N-Acetyl-D-sphingosine(C2-ceramide):ClassIPI3KPathway抑制剂
       5、Rapamycin:mTOR抑制剂
       6、XestosponginB/C:IP3R阻滞剂
       二、自噬抑制剂
       1、3-Methyladenine(3-MA):(ClassIIIPI3K)hVps34抑制剂
       2、BafilomycinA1:质子泵抑制剂
       3、Hydroxychloroquine(羟氯喹):Lysosomallumenalkalizer(溶酶体腔碱化剂)
除了选用上述工具药外,一般还需结合遗传学技术对自噬相关基因进行干预:包括反义RNA干扰技术(Knockdown)、突变株筛选、外源基因导入等。