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细胞增殖
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应用简介
       细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的细胞,用来补充体内衰老或死亡的细胞。
检测方法
       MTT,CCK-8,BrdU,EdU等方法是常见的细胞增殖检测技术,分别从代谢活性和DNA合成的角度来反应细胞的增殖情况。MTT和CCK-8检测原理为活细胞线粒体中的一些脱氢酶能使检测试剂还原为甲瓒,而死细胞无此功能。BrdU和EdU则能都在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子,通过基于与荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性。
MTT技术原理
       活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。
 
实验方法

常见问题及注意事项
       1、铺板密度不合理,均匀度不一致;
       2、实验分组不严谨;
       3、实验设置时间点不合理;
       4、MTT或CCK8加样时注意事项不明确;
       5、血清等影响:高浓度血清或药物颜色会影响试验孔的吸光度值;
       6、边缘效应:边缘孔的水分挥发较快,药物易被浓缩。