1.如何选择特殊细胞系培养基？

培养某种类型细胞没有特定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样比较好生长。总之，首先选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开端。

2.什么时候需要更换培养基？

看细胞生长密度来定的，或遵照细胞株基本数据上的替换时间，按时替换培养基就可以了。

3.能否使用与原来培养条件不同的培养基？

不可以。每一细胞株都有其特定使用且已适应的细胞培养基，如果突然使用和原来提供的培养条件不同的培养基，细胞大都无法很快的适应，造成细胞没法存活下去。

4.可否使用与原来培养条件不一样的血清种类？

不可以。血清是细胞培养上一个非常重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生很大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不一样的，血清使用错误常会造成细胞没法存活。

5.什么是FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum)和FCS (fetal calf serum)是相同的意思，两者都是指胎牛血清，是错误的字眼，请不要使用。CS (calf serum)则是指小牛血清。HS (horseserum)是指马血清。

6.培养细胞时应使用5%或10% CO2？或根本没有什么影响？

一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5% CO2培养细胞。

7.Hank's平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank's平衡盐溶液(HBS)和Earle's平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？

HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平，在Eagles (2.2 g/L)中比在Hanks (0.35 g/L)中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液，如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。

8.什么是细胞的接种密度？

依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。

9.悬浮性细胞应如何继代处理？

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高一点，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞的培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。

10.冷冻管应如何解冻？

取出冷冻管后，须立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管的爆裂。

11.细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？

除少数特别注明对DMSO敏感的细胞外，绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞)，在解冻之后，应直接放入含有10-15 ml新鲜培养基的培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。

文章出自：细胞实验外包    想了解更多请关注：http://www.do-gene.cn