细胞造模是生物医学研究中的关键步骤，过程中很容易因为各种细节问题导致造模失败，下面就来看看常见的细胞造模失败原因有哪些。

一、技术操作失误

1.‌ 操作环境与设备污染‌

• 超净工作台使用不当：未提前开启紫外灯消毒（至少30分钟），或消毒后立即操作

• 培养箱维护不足：长期未清洁内部，托盘积水未及时更换

• 其他设备污染：移液器、离心机、显微镜载物台等未定期消毒‌

2‌. 实验操作不规范‌

• 无菌操作意识薄弱：操作前未洗手或未更换无菌手套

• 移液与分装操作不当：移液时枪头触及瓶口外侧、桌面或其他非无菌表面后继续使用

• 细胞冻存与复苏不当：冻存管密封不严，复苏时水浴温度过高或时间过长‌

二、细胞选择不当

1‌. 供受者配型不合‌

• 供受者之间的人类白细胞抗原HLA配型差异大，免疫系统会将移植的造血干细胞识别为外来物进行攻击‌

2. 细胞类型选择错误‌

• 使用不合适的细胞系进行特定研究，如用动物细胞模型研究人类特有疾病

• 原代细胞与永生细胞系选择不当，导致表型失真‌

3‌. 细胞质量不佳‌

• 采集的细胞数量不足、活性差等影响植入

• 细胞系交叉污染：不同细胞系操作时未严格区分‌

三、培养条件控制不当

1‌. 样本因素‌

细胞数量不足：样本中所含的细胞数量过少，无法满足培养所需

细胞活力差：采集过程中受到不良因素影响，如操作不当导致细胞受损‌

2‌. 培养环境问题‌

培养基问题：成分不合适、质量不稳定

培养条件不当：温度、湿度、二氧化碳浓度等控制不准确

3D培养技术应用不当，未能模拟体内微环境‌

四、造模试剂使用不当

1‌. 试剂质量问题‌

• 购买的血清、培养基、抗生素等试剂在生产或运输过程中被污染

• 试剂反复冻融或长期存放于不当条件下，导致微生物滋生‌

2‌. 特定造模试剂问题‌

• 油酸钠和棕榈酸钠摩尔浓度比配制不当

• LPS刺激RAW264.7细胞时，浓度梯度和孵育时长控制不当‌

• CCl4或H2O2处理浓度过高或作用时间过长，导致细胞死亡‌

五、模型验证失败

1‌. 验证方法选择不当‌

• MTT法、ROS检测、PCR/WB等验证方法未针对特定模型优化

• 样本不一致、物种不一致、分子不一致导致验证结果不准确‌

2‌. 实验操作问题‌

• 训练参数配置不当：默认参数不适合特定数据集

• 数据预处理问题：图像和掩码的格式、位深不符合模型要求‌

• 抗体选择不当：一抗和二抗种属不匹配，导致无阳性条带或信号微弱‌

六、其他常见问题

1. 交叉污染‌

不同细胞系操作时未严格区分，共用实验操作台或枪头

培养液混用导致细胞系交叉污染‌

2. 个体差异‌

每个人的细胞特性存在差异，部分人的细胞可能对培养条件要求较为特殊

患者本身可能存在某些尚未被发现的疾病，影响了细胞的正常生长‌

3‌. 技术局限性‌

2D细胞模型难以模拟体内微环境，导致数据失真

传统动物模型与人类疾病存在种属差异‌

总结与建议

1. 严格遵循无菌操作规范，定期维护实验设备

2. 根据研究目的选择合适的细胞类型和培养条件

3. 优化造模试剂的使用浓度和作用时间

4. 采用多种方法验证模型有效性

5. 考虑使用3D培养技术提高模型真实性

6. 记录实验细节，便于问题追溯和优化

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