琼脂糖凝胶电泳是分子生物学实验室不可或缺的核心技术，主要用于分离、鉴定和纯化DNA片段。其原理在于DNA在pH中性的缓冲液中带负电荷，在电场驱动下向阳极迁移，不同大小的片段因在琼脂糖凝胶中受到的阻力不同而实现分离。掌握它，是探索基因奥秘的第一步。

一、琼脂糖凝胶电泳的原理

琼脂糖凝胶电泳是分离和鉴定DNA片段的经典技术。理解其原理，只需抓住三个关键：凝胶、电场和分子本身。

1、凝胶：制造“分子筛”跑道

琼脂糖是从海藻中提取的线性多糖。当其溶液冷却凝固时，会形成一个布满纳米级孔洞的三维网状结构，如同一座“分子筛”。而这些孔洞是DNA分子在凝胶中移动的唯一通道。

琼脂糖的浓度直接决定孔洞大小。浓度越高，孔洞越小，分辨率越高，适合分离小片段DNA（如2%的凝胶用于50-500bp片段）；浓度越低，孔洞越大，允许大片段DNA顺利通过（如1%的凝胶用于>1000bp的片段）。

2、电场：提供前进的“驱动力”

DNA骨架上的磷酸基团使其整体带负电荷。在电场中，它们会“异性相吸”，持续地向正极（阳极）泳动。电泳缓冲液则为电荷的传导提供了介质，确保了电场的稳定。

3、分子量：决定“跑步”的速度

不同大小的DNA分子在穿越凝胶孔洞时，会经历不同的阻力。小分子DNA体积小，行动灵巧，能快速穿过孔洞，跑得更远；大分子DNA体积大，容易被孔洞“卡住”或阻碍，迁移速度慢。

最终经过一段时间的电泳，原本混合的DNA样品便会按照分子量大小被分离开，在凝胶上形成一条条清晰的“带”。通过与已知大小的DNA Marker（标准参照物） 进行比较，我们就可以大概判断出未知DNA片段的大小。

1、称取琼脂糖

按所需浓度计算琼脂糖粉末用量。如：配制 100mL 1% 琼脂糖凝胶，需称取 1g 琼脂糖粉末。

2、溶解琼脂糖

将称好的琼脂糖粉末放入锥形瓶中，加入 50mL TAE 缓冲液，轻轻摇匀后，放入微波炉中加热（中高火，每次加热 30 秒，取出摇匀，重复 2-3 次），直到琼脂糖粉末完全溶解，溶液呈透明无颗粒状（注意：加热时锥形瓶需敞口，避免溶液沸腾溢出，取出时要戴手套防烫伤）。

3、加入核酸染料

加入适量的核酸染料，如 100mL 溶液加 10μL染料，具体浓度按染料说明书调整，轻轻颠倒锥形瓶混匀（避免产生气泡）。

4、倒胶与插梳

将电泳槽的胶托洗净擦干，放入水平台；将混匀的琼脂糖溶液缓慢倒入胶托中，避免产生气泡；然后将梳子垂直插入凝胶一端的凹槽中（梳子齿间距根据样品数量选择），静置 30-40 分钟，待凝胶完全凝固即可使用。使用的时候轻轻将梳子拔出。

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