实验室常用的是BALB/c-nu裸小鼠 ,伴随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸鼠体内正常T细胞会增多，所以接种肿瘤实验一般采用4--6周龄的裸鼠。

裸鼠成瘤实验技巧

1、成瘤实验的关键是细胞的状态，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前换上新鲜的培养基。

2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，目的为去除细胞中残余的血清。

3、用PBS或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度，一般皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支，接种体积为0.1-0.2ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml，如若有条件的实验室，也可以加基质胶以加速瘤块的生成，基质胶与PBS或无血清的比列为1:1。

4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成（如果接种量大，可以分批接种），途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。

5、选择的裸鼠一般在4-6周龄，体重16-18g左右，种植部位选择供血丰富区域，比如说腋窝中后部。

6、接种前用枪充分吹散细胞悬液，防止细胞成团而降低细胞成活率，并且导致小鼠接种细胞数量的差异过大。

7、接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，针头进入皮下之后左右滑动几次，以便细胞接种成团，尽量减少注射后细胞悬液从针眼溢出。

8、如何固定裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴。

9、接种后1-2周左右可以见到皮下开始慢慢出现肿块。

10、根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量计算，一般皮下成瘤的时间为1-2个月。肿瘤最好也不要生长过大，一般不要超过2000mm3。

11、肿瘤大小测量一般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤*长和*短部位。V=1/2*a*b2 (a为长轴，b为短轴)。

12、皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等。

裸鼠成瘤实验常见问题总结：

1、这个实验为什么要用裸鼠而不用普通的老鼠或者小白鼠？

裸鼠成瘤实验用的裸鼠，主要的特征是没有胸腺等免疫器官，几乎没有什么免疫力，所以不会免疫肿瘤细胞，易于成瘤。

2、瘤块长起来又消失？

肿瘤块先变小后变大很常见，很可能是炎症造成的，肿瘤细胞被裸鼠自身吸收，继续观察，几个星期之后看肿瘤会不会自己长出来，长不起来建议换鼠。

3、是否可以在一只螺鼠进行多个点接种？

不可以，一只鼠就只能接种一个点，因为一个老鼠身上有多个肿瘤块的情况下，可能会相互影响。

4、肿瘤长不出来是怎么回事？

一：肿瘤生长周期比较慢，一周开始生长肿块，大约需要1~2个月才能长成肿瘤；

二：可能是细胞状态差，活力不好，或是肿瘤细胞不易成瘤，需加入基质胶辅助或增大接种量或更换细胞系；

三：一方面可能是裸鼠周龄太大，或裸鼠免疫排斥，建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠（Nod-scid小鼠）。

5、肿瘤体积相差很大，大小不一？

首先，并不是所有的肿瘤都能够长得一样大小。其次，这可能跟小鼠周龄及接种细胞量不同所导致的，建议重新接种。

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