1.高效液相色谱仪原理--简介

高效液相色谱仪也叫高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱等，它是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

高效液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20% ，而80% 则需用高效液相色谱来分析。

由于HPLC分析不受温度和样品沸点限制，因此具有更广阔的应用潜力。经过30多年的迅速发展，高效液相色谱法在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研究已趋于成熟，现已成为化学化工、环境、药学、食品等多个领域中最具优势的分离分析方法之一。

液相色谱根据分离机理的不同可分为：

液固吸附色谱

液液分配色谱

离子交换色谱

离子对色谱法

分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)

（一）液-固吸附色谱

流动相为液体，固定相为固体吸附剂，根据物质吸附作用的不同来分离物质。

（二）液-液分配色谱

流动相和固定相都是液体的色谱法即为液-液色谱，是利用样品组分在两种不相溶的液相间的分配来进行分离。一种液相为流动相，另一种是涂于载体上的固定相。

流动相极性小于固定相极性的液-液色谱法称为正相分配色谱法。

流动相极性大于固定相极性的液-液色谱法称为反相分配色谱法。

（三）离子交换色谱

（四）离子对色谱法

（五）分子排阻色谱法

二、高效液相色谱仪结构组成

（1）泵的基本原理

（2）仪器：四元泵

（3）仪器：手动进样器——六通阀/定量环

（4）仪器：自动进样器

（5）色谱柱：柱温箱、色谱柱外挂架

（6）仪器：检测器——紫外

（7）仪器：化学工作站

（8）固定相与流动相

（9）流动相（反相）

三、HPLC的应用

在环保方面，HPLC可以应用在：

（1）农药残留量分析 ：含氯农药 、有机磷 农药 、除虫菊等

（2）致癌物质：硝基呋喃及其代谢物、霉素、亚硝胺、苯并芘等

（3）水质分析：内分泌污染物等

在生化方面，HPLC可以应用于：

（1）蛋白质分析

（2）肽类的分析

（3）核酸分析

（4）氨基酸分析

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