视网膜缺血再灌注( retinal ischemia reperfusion， RIR) 损伤即缺血性眼病患者的视网膜在恢复供血后， 出现明显的功能障碍， 甚至发生不可逆性损伤， 再灌注并不缓解视网膜细胞的损伤， 反而加剧了细胞的死亡 。目前对于视网膜缺血再灌注损害的发病机制研究较多， 包括氧自由基学说、一氧化氮学说、钙通道学说、炎症反应学说、兴奋性氨基酸学说、基因调控学说、细胞凋亡学说等 。铁死亡是缺血再灌注损伤中细胞死亡的重要方式之一， 在脑部、肠道缺血再灌注损伤等过程中发挥着重要作用，但目前铁死亡在视网膜缺血再灌注中具体发病机制还没有深入的研究。有研究建立了大鼠视网膜缺血再灌注损伤的模型， 通过检测铁死亡关键因子、 蛋白、 基因及线粒体的变化， 来深入探讨铁死亡在视网膜缺血再灌注损伤中的作用机制 [1]。

1、实验动物：SD大鼠，雄性，6-8周龄，体重 200-250 g ，SPF级别。

2、实验分组和造模

① 对照组（Control）

② 模型组（I/R）

3、造模

实验动物适应性饲养 7天后，进行如下造模步骤：

（1）将大鼠深度麻醉后，侧卧位固定在操作台上，左眼朝上，用爱尔碘对眼睑周围进行消毒处理。

（2）滴入0.5%的奥布卡因滴眼液滴眼局部麻醉，0.5％ 氯霉素地塞米松眼药水清洗结膜囊，复方托比卡胺滴眼液散瞳。

（3）将连接生理盐水的 32 G 针头刺入前房， 插针过程中， 动作缓慢轻柔， 注意不要将眼球插穿。 针头插好后， 医用胶带固定输液管防止针头滑落。 逐渐将输液瓶升高， 使高度差为 149 cm（ 110 mmHg）。 此时可观察到眼球迅速变硬， 球结膜苍白。 持续 60 min 后， 逐渐降低输液瓶高度至大鼠眼球水平使眼内压缓慢降低， 以恢复视网膜血供， 此时关闭输液器并拔出前房灌注针头， 虹膜及球结膜颜色迅速恢复正常， 眼底视网膜呈橘红色， 说明阻断的血管重新开放， 形成再灌注， 即 I/R 模型制作成功。对照组的大鼠则只进行左眼前房穿刺但是不给予升高眼压的处理。 在所有大鼠中， 选择左眼进行实验。

4、模型检测

造模后分别饲养 24 h， 48 h， 72 h 时安乐死大鼠， 进行取材视网膜组织 ，HE染色和透射电镜检测。

5、模型特点

（1）HE 染色结果显示： 正常大鼠的视网膜结构紧密， RGCs 排列整齐； 缺血再灌注 24 h 视网膜神经纤维层、 神经节细胞层均出现大量空泡,视网膜厚度增加； 48 h 水肿到达高峰， 内外节肿胀、疏松、 空泡化； 72 h 神经节细胞层核浓缩,细胞数量减少， 视网膜水肿减退， 开始变薄。

（2）透射电镜检测结果显示： 正常大鼠的视网膜 RGCs 线粒体较大， 呈圆球状， RPE 细胞和光感受器细胞线粒体长， 呈棒状， 外膜光滑， 内膜向内形成线粒体嵴， 线粒体嵴丰富； 48 h 模型组视锥视杆细胞层紊乱， RPE 细胞、光感受器细胞、 RGC 细胞内线粒体具有比较明显的体积变小趋势； 24 h模型组线粒体皱缩， 但程度不如 48 h 明显； 而 72 h 模型组有所恢复， 各层线粒体体积也开始趋近于正常组。

参考文献：

[1]王晓璇.铁死亡在视网膜缺血再灌注损伤中的作用机制及干预研究[D].河北医科大学,2024.DOI:10.27111/d.cnki.ghyku.2024.000094.

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