一、实验原理

结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagen fiber）是 分布最广、含量最多的一种纤维。Masson 三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原 纤维染色权威而经典的技术方法。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透 性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此 Masson 染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

二、实验材料

Masson 试剂盒

产品组成：

试剂(A):Weigert 铁苏木素染色液

A1:Weigert 染液A 25ml RT避光

A2:Weigert 染液B 25ml RT

临用时，取 A1、A2 等量混合，成为 Weigert 铁苏木素染色液，不可预配制后放置。

试剂(B): 酸性乙醇分化液 50ml RT

试剂(C): Masson 蓝化液 50ml RT

试剂(D): 丽春红品红染色液 50ml RT 避光

试剂(E): 弱酸溶液 50ml RT

试剂(F): 磷钼酸溶液 50ml RT 避光

试剂(G): 苯胺蓝染色液 50ml RT 避光

自备材料： 固定液：选用甲醛升汞或甲醛盐溶液

系列乙醇

二甲苯

操作步骤（仅供参考）： 1、 切片常规脱蜡至水。

2、 用配制好的 Weigert 铁苏木素染色液染色 5min-10min。

3、 酸性乙醇分化液分化 5-15s，水洗。

4、 Masson 蓝化液返蓝 3-5min，水洗。

5、 蒸馏水洗 1min。

6、 丽春红品红染色液染色 5-10min。

7、 在上述操作过程中按蒸馏水：弱酸溶液=2:1 比例配置弱酸工作液，用弱酸工作液洗 1min。

8、 磷钼酸溶液洗 1-2min

9、 用配置好的弱酸工作液洗 1min。

10、直接放入苯胺蓝染色液中染色 1-2min。

11、用配置好的弱酸工作液洗 1min。

12、95%乙醇快速脱水。

13、无水乙醇脱水 3 次，每次 5-10s。

14、二甲苯透明 3 次，每次 1-2min。

15、中性树胶封固。

染色结果： 细胞核、胶原纤维/蛋白呈蓝色

细胞浆、肌肉、红细胞呈红色

注意事项：

1、 切片脱蜡应尽量干净。

2、 取 A1、A2 等量混合，成为 Weigert 铁苏木素染色液，一般 24h 失去

染色能力。

3、 组织固定起着非常重要的作用，使用不同的固定液可延长或缩短染色 时间。

4、 经典 masson 三色染色中，用 Harris 苏木精染核，但 Harris 苏木精染核 后切片颜色不够鲜艳，本染液采 用 Weigert 染细胞核，因为染色的目的主要在于区分胶原纤维和肌纤维，一般也可以省略该染色步骤。

5、 酸性乙醇分化时间应该依据切片薄厚，组织的类别和新旧而定。

6、 弱酸溶液可使色彩更清晰鲜艳，如使用量大可自行配置 0.1-0.3%乙酸溶液 予以替代。

7、 磷钼酸分化时要在镜下控制，分化到胶原纤维呈淡红色、纤维呈红色即可。分化时间根据染色深浅而定， 一般 1-2min。

8、 Masson 蓝化液亦可自行配制 Scoot 促蓝液或 0.1-1%碳酸锂水溶液予以替代。

9、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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