1.渗透性检测

待细胞形成致密单层之后，对模型进行通透性检测实验。Transwell上室加入0.5 mg/mL的FITC-葡聚糖溶液(无血清、无酚红DMEM配制)0.1 mL，下室加入0.5 mg/mL的无FITC标记的葡聚糖溶液(无血清、无酚红DMEM配制)0.6 mL。置于细胞培养箱孵育1h后分别从Transwell装置的上、下室提取样品，进行荧光强度检测。计算细胞层的Pd值。Pd (cm/s) =(C/t)(1/A)×(V/L)(C是下室FITC-葡聚糖浓度，t是时间间隔，A是表面积，V是下室溶液体积，L是上室FITC-葡聚糖浓度)。

2.跨内皮电阻的测定

hCMEC/D3细胞培养至第10天过程中，从第二天开始，每次换液利用 EVOM2电阻仪测定细胞跨膜电阻值。当TEER值大于200 Ω⋅cm2时说明模型建立成功，可进行后续给药实验。

3.紧密连接蛋白及SLCs、ABC转运体的表达

TJP主要包含claudins、occludins、junction adhesion molecule（JAM）和ZO。可以通过检测这些蛋白的表达评价BBB体外模型的紧密连接性。

检测SLCs、ABC转运体的表达可用于评价BBB体外模型的渗透性。

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