将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。原代细胞培养的步骤一般是：取材→分离→培养和维持，,天我们重点介绍原代细胞的取材和分离方法。一、取材人和动物细胞的取材是原代细胞

原代细胞的体外培养过程中，其生长时往往会混有多种不同类型的细胞。比如来自皮肤组织的细胞进行培养时可以出现表皮细胞与纤维下拨同时生长的情况。所以原代细胞的分离纯化在初期细胞培养时比较关键。原代细胞的纯化方法主要有以下几种：一、自然纯化法：原代细胞由于具有较强的增殖能力，因此可以采用通过长,期多代传代生物

细胞划痕实验是指将细胞培养在培养皿或平板上，待细胞融合后用枪头或其他硬物在中央区域画一条线，这条线内的细胞被机械力去除掉了，然后将细胞继续培养，观察细胞向无细胞的划痕区域迁移的情况，来判断细胞的迁移能力。其意义在于：价格低廉，操作简单，还有很重要的一点在于细胞外,围环境简单、单纯，容易控制，是肿瘤细胞

当我们需要运输或者长，期不用某种细胞时，通常会使用冻存的方法来保存。若未做好细胞冻存，还会直接影响后续细胞复苏状态，所以细胞冻存的重要性不容小觑。本期细胞学堂将带来贴壁细胞和悬浮细胞的冻存操作步骤及注意事项，以便大家查漏补缺。在进行冻存操作，可预先配置好冻存液；若使用无血清非程序冻存液，则无需自己配

细胞培养物来源于原代外植体或分散的细胞悬液。通常在这样的培养物中原代细胞增殖形成汇合地单层细胞或密集地细胞悬液。这类细胞生命周期有限，在有限的生命周期内需掌握好细胞的生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的一致性。细胞系是不断生长，分化的细胞群，因其经过遗传改造，致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细

1. 需要长势良好的细胞、trizol、PBS缓冲液、三氯甲烷、异丙醇、无水乙醇、无RNA酶水或者DEPC水。2. RNA提取怕的就是被RNA酶给降解了，所以要戴好口罩，操作台面干净卫生。3. 细胞用PBS洗干净，洗净细胞碎片，细胞外泌物等，加trizol试剂，裂解细胞，后收集到离心管中，加入五分体积的三氯甲烷，混匀后室温静置10分钟左右，